Zestaw do wykrywania genotypowania wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV) (metoda fluorescencyjna PCR)

A. Przeznaczenie

• Zestaw ten służy do jakościowego wykrywania in vitro wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV) wysokiego i niskiego ryzyka.

• HPV wysokiego ryzyka obejmuje typy 16,18,26,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,82;  

• HPV niskiego ryzyka obejmuje typy 6,11,40,42,43,44/55,54,57/71,61,70,72,81,84.

B. Zasada

• Odczynnik ten jest systemem testowym Taqman® qPCR opartym na multipleksowej sondzie fluorescencyjnej.

• Specyficzne startery i sondy są przeznaczone do wykrywania różnych typów wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV).

• Kontrolę wewnętrzną (IC) stosuje się jako metodę monitorowania w celu uniknięcia fałszywie ujemnych wyników testu.

• Dodawany jest układ enzym UDG/dUTP w celu degradacji produktu amplifikacji i uniknięcia fałszywie dodatnich wyników.

• Zestaw ten jest w pełni wstępnie zmieszanym systemem liofilizowanym. W odczynnikach umieszczono wstępnie enzym Taq, enzym UDG, bufor reakcyjny, specyficzne startery i sondy.

C. Komponenty

Składniki	8 próbek/zestaw	24 próbki/zestaw	Składnik
Odczynnik liofilizowany HP04	Probówki w paski 8×8	Probówki w paski 24×8	Specyficzne startery i sondy do wykrywania docelowych patogenów, mieszanka dNTP/dUTP, Mg2+, polimeraza Tac i enzym UDG
Bufor do lizy HPV	1 ml×1 probówka	2,5 ml×1 probówka	Środek powierzchniowo czynny, zrównoważony roztwór soli
Kontrola pozytywna HPV	400 mL×1 probówka	400 mL×1 probówka	Plazmid zawierający każdą docelową sekwencję genu
Kontrola ujemna HPV	400 mL×1 probówka	400 mL×1 probówka	Plazmid zawierający sekwencję kontroli wewnętrznej
Rozwiązanie rozpuszczające	1 ml×1 probówka	1 ml x 3 probówki	Stabilizator

D. Przechowywanie i okres przydatności do spożycia

Transport w temperaturze pokojowej poniżej 37 ℃ (<1 miesiąc).

Przechowywane w temperaturze -20 ℃ ± 5 ℃ przez 1 rok.

Powtarzające się zamrażanie i rozmrażanie nie powinno przekraczać 7 razy.

MI.  Omówienie procesu testowania

F. Amplifikacja PCR

1. Włóż probówki reakcyjne do aparatu do PCR i ustaw nazwy poszczególnych studzienek reakcyjnych w odpowiedniej kolejności.

2. Wybierz cztery kanały fluorescencji FAM, VIC/HEX, ROX i CY5 do detekcji. Odpowiednie cele każdego kanału fluorescencji pokazano w poniższej tabeli:

Lokalizacja	FAM	VIC/HEX	ROX	CY5
Cóż 1	HPV typu 16	HPV typu 18	HPV typu 26	Kontrola wewnętrzna (IC)
Cóż 2	HPV typu 31	typ HPV 33	HPV typu 35	typ HPV 39
Cóż 3	HPV typu 45	HPV typu 51	HPV typu 52	typ wirusa HPV 53
Cóż 4	HPV typu 56	HPV typu 58	typ HPV 59	HPV typu 68
Cóż 5	HPV typu 66	HPV typu 73	HPV typu 82	HPV typu 81
Cóż 6	HPV typu 6	HPV typu 11	HPV typu 40	HPV typu 42
Cóż 7	Typ wirusa HPV 43	Typ wirusa HPV 44/55	HPV typu 54	HPV typu 61
Cóż 8	Typ wirusa HPV 57/71	HPV typu 70	HPV typu 72	HPV typu 84

G.  Analiza i interpretacja wyników

Proszę zapoznać się z instrukcją obsługi.

H. Specyfikacja wydajności

1. Ograniczenie wykrywania: 1000 kopii/ml

2. Precyzja: Współczynnik zmienności (CV,%) wartości Ct precyzji w obrębie partii/pomiędzy seriami wynosi ≤5%.

3. Dokładność: Stopień zgodności odniesienia negatywnego/pozytywnego: 100%.

4. Swoistość: Organizmy fargetów analizowano in silico pod kątem potencjalnej reaktywności krzyżowej ze starterami lub sekwencjami sondy.

Homologia z innymi gatunkami jest poniżej 80%.

Analiza specyficzności wykazała, że ​​nie występuje reakcja krzyżowa z Trichomonas pochwylis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, gardnerella pochwylis, haemophilus ducreyi, candida albicans, streptococcus agalactiae, ureaplasma urealyticum, ureaplasma parvum, mycoplasma hominis, mycoplasma genitalium, treponema pallidum, wirus opryszczki pospolitej typu 1 i 2.